Анализ транспортной функции альбумина методом ЭПР

Aнализ транспортных свойств альбумина методом ЭПР (также называемый АТА-тест) — лабораторный тест крови для молекулярной диагностики структурных и функциональных нарушений основного транспортного белка крови — сывороточного альбумина методом ЭПР-спектроскопии. Применяется в диагностике онкологических заболеваний, септических осложнений и токсемий.

Принцип метода

Тест основан на исследовании методом ЭПР-спектроскопии взаимодействия спинмеченой жирной кислоты с молекулами сывороточного альбумина.

В методе исследуют пробу сыворотки крови, в которую добавляют спиновый зонд — спинмеченую жирную кислоту 16-доксил стеарат. Молекулы спинового зонда связываются специфически с молекулами альбумина, на которых занимают две основные позиции — в первичных сайтах связывания в доменах альбумина, где их движение ограничено, и в более просторной гидрофобной области между доменами белка внутри его глобулы. Такие позиции спинового зонда позволяют достаточно полно оценивать конформацию молекул альбумина. Часть молекул зонда остается в сыворотке в свободном состоянии. Соотношение фракций (концентраций) связанного и свободного спинового зонда позволяет оценить функциональную активность молекул альбумина.

Связанная на белке молекула зонда приобретает ограниченную подвижность, в результате чего изменяется ее ЭПР-спектр, отражая характеристики той части белка, в которой находится спиновый зонд. Анализ ЭПР-спектра позволяет рассчитать показатели конформации и функциональной активности молекул альбумина.

Исследуемый материал — 100 мкл сыворотки или плазмы крови.

Процедура исследования включает смешивание пробы сыворотки с реактивом спинового зонда, инкубирование смеси, измерение ЭПР-спектра сыворотки со спиновым зондом и анализ ЭПР-спектра с расчетом показателей конформации и функциональной активности молекул альбумина.

В диагностике онкологических заболеваний

Диагностируют специфическое нарушение конформации молекул альбумина, вызванное (или ассоциированное с) изменениями в составе метаболитов, транспортируемых сывороточным альбумином при росте злокачественной опухоли (при активной пролиферации раковых клеток, потребляющих и выделяющих метаболиты в аномальных количествах). Клинические исследования показали диагностическую чувствительность и специфичность теста на уровне 90 %.

Применение:

• в качестве скрининг-теста для выявления у пациента метаболических нарушений, специфичных для роста злокачественных новообразований;
• для оценки эффективности проведенного лечения: остановлен рост злокачественной опухоли или болезнь прогрессирует;
• для диагностики рецидивов.

В диагностике септических осложнений и токсемий

Диагностируется снижение функциональной активности сывороточного альбумина (эффективности связывания), что наблюдается при токсемии (повышении концентрации токсических молекул в крови) и проявляется раньше других клинических симптомов.

Применение оценки функциональной активности сывороточного альбумина:

• прогноз и ранняя диагностика септических осложнений (через 1 — 2 часа после операции);
• диагностика тяжелой преэклампсии (гестоза) у женщин во 2-м и 3-м триместрах беременности;
• диагностика функционального состояния трансплантата почки;
• ранняя диагностика врождённой пневмонии у новорожденных.